siRNA轉染

1. siRNA導入細胞的方法

siRNA導入細胞的方法有化學轉染技術、電穿孔法、磷酸鈣共沉淀技術、顯微注射和載體導入技術等。技術的選擇要考慮轉入時細胞的承受能力、細胞對病毒感染的敏感性、細胞生長特性等實驗條件的限制。對于貼壁細胞來講化學轉染技術比較合適，而對于懸浮細胞，電穿孔更有效。

2. 轉染試劑的選擇

在選擇轉染試劑時，首先考慮的是特定的細胞株，而不是被導入細胞中的物質(zhì)。在試劑的選擇上建議選擇線性PEI轉染試劑。

3. 篩選轉染試劑

好的轉染試劑有以下特點：如下表

4. 細胞在轉染過程中死亡的處理方法

如果細胞在轉染后大多數(shù)死亡，那就說明轉染條件不適合細胞生存，需要進行進一步的優(yōu)化。在優(yōu)化轉染條件時需要考慮的因素：轉染試劑（線性PEI轉染試劑）和細胞特異性條件。例如：siRNA與轉染試劑的比例、轉染時間、細胞傳代數(shù)和細胞密度等。

5. 提高難以轉染的細胞轉染效率的方法以及轉染效率的確定

如何提高難轉染細胞的轉染效率是目前研究的一個技術難題。一般推薦使用電轉移法，該方法對細胞的損傷比較大，所以這種方法不太合適。熒光標記siRNA是熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡和流式細胞術常用的檢測轉染效率的方法。

6. 轉染后細胞死亡的原因及轉染條件的優(yōu)化

選擇像線性PEI轉染試劑這種毒性小的轉染試劑也可以達到優(yōu)化轉染條件的目的。另外，如果siRNA靶向的基因對維持細胞生長非常重要，那么細胞死亡的現(xiàn)象可能是由基因干擾。如果檢測受到細胞死亡的影響，可以適當調(diào)整檢測時間。